Как работает FlowCam Cyano?

Объяснение конфигурации и флуоресценции обнаружения FlowCam ® Cyano

ОБНАРУЖЕНИЕ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ

ОБНАРУЖЕНИЕ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ

FlowCam ® Cyano использует красный лазер (633 Нм) для возбуждения фикоцианина, пигмента, присутствующего в цианобактериях, и хлорофилла, пигмента, присутствующего в зеленых водорослях. Излучение возбуждения уникально для каждого пигмента, и их соотношение относительной флуоресценции может быть использовано для дифференциации зеленых водорослей и цианобактерий.

(Слева): Относительная длина волны интенсивности флуоресценции для фотосинтетических пигментов: фикоэритрин, фикоцианин и хлорофилл. Синие и зеленые прямоугольники показывают диапазон флуоресценции фикоцианина (650 ± 10 нм) и хлорофилла (700 ± 10 нм), соответственно, обнаруженных FlowCam Cyano.

FLOWCAM CYANO КОНФИГУРАЦИЯ

Принципиальная схема FlowCam Cyano изображена слева. Далее описывается флуоресценция хлорофилла и фикоцианина от точки возбуждения до его использования в анализе пигмента:

  1. Красный лазер (633 нм) возбуждает флуоресценцию микроводорослей, когда образец проходит через проточную ячейку.
  2. Излучаемая флуоресценция передается через длиннопроходный светоделитель с последующими селективными режекторными фильтрами. Узкополосные фильтры ограничивают выбросы, принимаемые фотоумножителями (ФЭУ). PMT 1 получает флуоресцентный представитель хлорофилла (700 ± 10 нм). PMT 2 получает флуоресцентный представитель фикоцианина (650 ± 10 нм).

FLOWCAM CYANO КОНФИГУРАЦИЯ

Принципиальная схема FlowCam Cyano изображена слева. Далее описывается флуоресценция хлорофилла и фикоцианина от точки возбуждения до его использования в анализе пигмента:

  1. Красный лазер (633 нм) возбуждает флуоресценцию микроводорослей, когда образец проходит через проточную ячейку.
  2. Излучаемая флуоресценция передается через длиннопроходный светоделитель с последующими селективными режекторными фильтрами. Узкополосные фильтры ограничивают выбросы, принимаемые фотоумножителями (ФЭУ). PMT 1 получает флуоресцентный представитель хлорофилла (700 ± 10 нм). PMT 2 получает флуоресцентный представитель фикоцианина (650 ± 10 нм).

ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СООТНОШЕНИЯ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ: АНАЛИЗ VISUALSPREADSHEET

ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СООТНОШЕНИЯ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ: АНАЛИЗ VISUALSPREADSHEET

3.  VisualSpreadsheet ®  , программное обеспечение для анализа, связанное с FlowCam, вычисляет отношение канала  2 / канала 1 для каждой отображаемой ячейки, которое рассчитывается на основе относительных интенсивностей флуоресценции,  полученных PMT 2. 

Отображаемые ячейки могут быть отсортированы в VisualSpreadsheet по соотношению Ch2 / Ch1. На приведенном выше рисунке коэффициент флуоресценции каждой ячейки нанесен на нижний правый график с пиком Ch 2 в качестве оси y и пиком Ch 1 в качестве оси x. Соотношения Ch2 / Ch1> 1 указывают на зеленые водоросли (слева), а соотношения Ch2 / Ch1 <1 указывают на цианобактерии (справа).